過(guò)氧化物酶(POD)測(cè)試盒（測(cè)植物）

（測(cè)植物）

一、測(cè)定原理：

利用過(guò)氧化物酶(POD)催化過(guò)氧化氫反應(yīng)的原理,通過(guò)測(cè)定

420nm 處吸光度的變化得出其酶活性。

二、試劑的組成和配制（100 管/48 樣）：

試劑一：60mL 液體×4 瓶,4℃可保存 6 個(gè)月。

試劑二：粉劑×3 瓶,4℃可保存 6 個(gè)月。

試劑二應(yīng)用液的配制：臨用每瓶粉劑加入 10mL 的雙蒸水溶

解， 4℃避光保存。（顏色變深以后棄用）

試劑三：5mL 液體×1 瓶， 4℃可保存 6 個(gè)月。

試劑三應(yīng)用液的配制：臨用前用蒸餾水 15～30 倍稀釋，使

得在 1cm 光徑、波長(zhǎng) 240nm 下，蒸餾水調(diào)零時(shí)，

試劑三應(yīng)用液的吸光值保持在 0.4 左右，現(xiàn)用現(xiàn)配。

若吸光值太高,則加蒸餾水稀釋,若吸光值太低,則

加入適量試劑三。（一般在 25 倍左右稀釋）

試劑四：50mL 液體×2 瓶， 4℃可保存 6 個(gè)月。

三、操作步驟：

1、前處理：

植物組織勻漿的制備：準(zhǔn)確稱取植物組織重量，按照重

量（g）

:體積(mL)=1:9 的比例加入 9 倍體積的勻漿介質(zhì)（推

薦使用生理鹽水或磷酸鹽緩沖液︰0.1mol /L pH7～7.4），

冰水浴條件下制備成 10％的組織勻漿液，3500 轉(zhuǎn)/分離心

10 分鐘后，取上清液進(jìn)行測(cè)定。

五、注意事項(xiàng)：

1、樣本測(cè)試前請(qǐng)選取2 例預(yù)期差異的樣本，稀釋成不同濃度

（推薦 5 倍、10 倍、20 倍稀釋）進(jìn)行預(yù)試，選取樣本濃

度（測(cè)定 OD—對(duì)照 OD 在 0.2～0.4 內(nèi)對(duì)應(yīng)的樣本濃度為

濃度）；

2、本試劑盒測(cè)定時(shí)也可在反應(yīng)完后吸取 200μL 反應(yīng)液進(jìn)入 96

孔板中，酶標(biāo)儀 420nm（±10nm）處讀取吸光值，此時(shí)光

徑約為 0.576cm（此值為大概值，并無(wú)準(zhǔn)確依據(jù)）代入計(jì)算；

3、試劑三在調(diào)濃度時(shí)，是在分光光度計(jì) 240nm（紫外波長(zhǎng)）

下，1cm 光徑石英比色皿中讀數(shù)達(dá)到 0.4 左右，如非使用

石英材質(zhì)比色皿，可能無(wú)法檢測(cè)。

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