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活性氧ROS檢測(cè)試劑盒（綠色熒光）

1. 本試劑盒特別適用于貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞活性氧的檢測(cè)。對(duì)于動(dòng)物組織樣本而言，應(yīng)盡量選擇新鮮組織，勻漿操作應(yīng)盡量快速，以減少實(shí)驗(yàn)誤差，如果樣本已經(jīng)凍存，則無法保證檢測(cè)結(jié)果的可靠性。

2. DCFH-DA可稀釋于培養(yǎng)基或緩沖液中。血清或培養(yǎng)基的顏色并不會(huì)影響DCFH-DA及細(xì)胞內(nèi)熒光的產(chǎn)生，但可能會(huì)影響熒光顯微鏡觀察，干擾熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀的熒光測(cè)定。如果用上述儀器進(jìn)行測(cè)定時(shí)，可將DCFH-DA稀釋于無酚紅培養(yǎng)基或適宜的緩沖液如PBS中。

3. 加入DCFH-DA的時(shí)機(jī)和孵育時(shí)間，以至能順利檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧為目的。當(dāng)細(xì)胞藥物處理時(shí)間較短(如<2 小時(shí))或預(yù)計(jì)ROS效應(yīng)較弱時(shí)，可將DCFH-DA在藥物處理之前或者與藥物同時(shí)加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中；反之，當(dāng)藥物處理時(shí)間較長(如>6小時(shí))或預(yù)計(jì)產(chǎn)生ROS效應(yīng)較強(qiáng)時(shí)，可將DCFH-DA在藥物處理之后再加入。

4. 活性氧供體內(nèi)含高純度12 mM 的H₂O₂。加入細(xì)胞后可使DCFH-DA氧化為DCF呈現(xiàn)強(qiáng)綠色熒光。該試劑的細(xì)胞工作濃度為20-100 µM或更低濃度，當(dāng)其濃度超過200µM時(shí)，將產(chǎn)生細(xì)胞毒性。如果用戶熟悉ROS熒光或?qū)嶒?yàn)沒有必要采用陽性對(duì)照，可以不加該試劑。一般情況下，活性氧供體加入到細(xì)胞30min左右即可產(chǎn)生明顯的綠色熒光。

活性氧ROS檢測(cè)試劑盒（綠色熒光）