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羧酸酯酶活性測(cè)定試劑盒 生化試劑

羧酸酯酶活性測(cè)定試劑盒,哺乳動(dòng)物羧酸酯酶(CarE)廣泛分布于組織和器官中,大部分的羧酸酯酶屬于絲-氨酸水解酶家族。

產(chǎn)品型號(hào):

更新時(shí)間:2025-01-23

羧酸酯酶活性測(cè)定試劑盒

 Carboxylesterase,分光光度法 50T/48樣)

一、測(cè)定意義

哺乳動(dòng)物羧酸酯酶(CarE)廣泛分布于組織和器官中,

大部分的羧酸酯酶屬于絲-氨酸水解酶家族。CarE催化含酯

鍵、酰胺鍵和硫酯鍵的內(nèi)源性和外源性物質(zhì)的水解,但不

能催化水解乙酰膽-堿及其類似物。CarE參與脂質(zhì)運(yùn)輸和代

謝,并且與多種藥物、環(huán)境毒物以及致癌物的解毒和代謝

有關(guān),有機(jī)磷農(nóng)藥可結(jié)合并且抑制CarE活性。

二、測(cè)定原理

CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯,固藍(lán)顯色,450nm

測(cè)光吸收速率來監(jiān)測(cè)萘酯生成速率,從而計(jì)算CarE活性。

三、自備儀器用品

可見分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液

器槍、1mL玻璃比色皿、無水乙醇和蒸餾水。

四、試劑組成和配制 (未開封產(chǎn)品3個(gè)月內(nèi)有效)

試劑一:液體50mL×1 瓶,4℃保存

試劑二:液體30mL×2 瓶,4℃保存

試劑三:粉劑×2支,4℃保存,臨用前取1支試劑三加1.2mL

無水乙醇充分溶解

試劑四:粉劑×2支,-20℃保存

工作液配制:臨用前取試劑二1瓶,取少量試劑二加入到1

支試劑四中溶解,然后把溶解的1支試劑四和1支試

劑三加入到該瓶試劑二中,混勻充分,過濾,4℃避

光保存,可用1周。

五、樣本前處理

1、細(xì)菌、細(xì)胞樣品制備:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離

心后棄上清;按照每200萬細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL試劑

一,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率20%,超聲3s,間隔

10s,重復(fù)30次);12000g4℃離心30分鐘,取上清液

待測(cè)。

2、按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例

(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿。

12000g,4℃離心30分鐘,取上清液待測(cè)。

3、液體樣本:直接取樣。

六、測(cè)定步驟

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到450nm,用蒸餾

水調(diào)零。

2. 工作液在37℃中預(yù)熱30min 以上。

3. 空白管:依次在1mL 玻璃比色皿中依次加入5μL蒸餾水,

1000μL預(yù)熱的工作液,迅速混勻后在450nm測(cè)定10s

190s光吸收A1 A2A空白管=A2-A1。注意:空白管只需

1-2次。

4. 測(cè)定管::依次在1mL 玻璃比色皿中依次加入5μL上清

液,1000μL預(yù)熱的工作液,迅速混勻后在450nm測(cè)定10s

190s光吸收A3 A4,A測(cè)定管=A4-A3。

 羧酸酯酶活性測(cè)定試劑盒

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